|返回首页 | 大会特别演讲 | 大会专题讲座 | 大会自由发言 | 大会展板展示 | 大会综合信息 | 眼科厂商名录
|您的位置>>大会专题讲座>>角膜病>>眼表干细胞生物学特性的研究进展[转载] 发送给好友  发表评论,已评论0次   阅读:1576次 关键词:干细胞

 
   [作者]: maojin [单位或文章来源]: 潘志强 张文华 北京同仁眼科中心,北京市眼科研究所 [加入时间]:2002/8/24
  眼表干细胞生物学特性的研究进展   
打印文档
  文字 背景 字号 保存设置   人气指数:1576   



哺乳动物的分化组织有大约60%是上皮细胞,绝大多数的上皮细胞均有干细胞,干细胞可以终身复制、增殖,可以形成分化细胞。目前有关干细胞的认识主要来源于细胞动力学(cell kinetics)和克隆分析(clonal analysis)方面的研究,尚缺乏足够的阳性标志物进行鉴定。
无论是胃腺上皮细胞、唾液腺上皮、肝叶上皮细胞、肾小球上皮细胞均有清晰的增殖结构单位(Structural-Proliferative Units),在角膜缘,Vogt栅栏可能是特化的增殖结构单位。眼表面由高度特异的上皮细胞覆盖,包括多层鳞状角膜上皮和多层鳞状、立方形或假柱状结膜上皮,其中散在杯状细胞、淋巴细胞、色素细胞和郎罕细胞。据研究,角膜上皮细胞和结膜上皮细胞分别属于不同的细胞表型,它们的新陈代谢均起源不同的干细胞(Stem cells),其中角膜干细胞位于角膜缘特别是上部角膜缘,而结膜干细胞可能位于结膜穹隆和睑缘结膜处。
一、角膜干细胞
角膜干细胞位于角膜缘基底部的实验和临床证据很多,绝大多数人同意角膜干细胞位于角膜缘基底部的推测,该细胞分化形成瞬时放大细胞(transient amplifying cells,TAC),主要位于角膜缘和周边基底部细胞,分化程度高并表达角质蛋白K3;然而,并无确切的证据否认角膜周边基底部也存在角膜干细胞,正如外周血中也存在少量干细胞一样。
1、干细胞增殖:在角膜中央上皮缺损或TPA的刺激下,角膜干细胞从慢细胞周期细胞(BrdU标记证实)进入快速的DNA合成期,即干细胞因刺激分化增殖为瞬时放大细胞(TAC),进而参与组织的再生修复。研究显示,角膜TAC特别是由干细胞分裂形成的早期TAC具有较高的增殖力,细胞周期较短(18h~72h),在体外培养条件下,TAC可以生成终末克隆(terminal colonies),此克隆株类似于旁克隆(paraclone)株,代表了几乎没有分化储备能力的TAC;而角膜缘上皮细胞可以生长成易培养的大克隆株,类似于单克隆(holoclone),即具有高增殖力的角膜干细胞。p63转录因子(p53的同源体,参与上皮细胞的增殖)在细胞处于单克隆状态时,明显表达p63,而转化为旁克隆状态(代表瞬时放大细胞)后,尽管细胞的增殖力高,但是不表达p63,说明p63可能是一种角膜缘干细胞的标志,可以用于鉴定角膜缘干细胞和瞬时放大细胞。
2、干细胞分化:角膜缘基底细胞表达角质蛋白K14、K19,表浅上皮细胞表达角质蛋白K3、K12,提示角质蛋白K14、K19也可用于确定角膜缘上皮细胞是否分化;表皮的基底细胞中有10%的细胞不表达Cx43蛋白,该蛋白是上皮细胞中的连接蛋白,可作为上皮性干细胞的阴性标志。角膜缘上皮细胞不表达Cx43和Cx50,向一个角膜缘上皮细胞注射荧光素后不能向另一细胞转运;这些细胞显示22-25PF电容,电阻在1GW以下,正好是一个独立的上皮细胞的电量,说明角膜缘上皮细胞的新陈代谢低,与干细胞具有新陈代谢解耦联性相符合;同时,用于鉴别角膜缘基底细胞的标志还有peanut lectin,Maakia amurensis agglutinin,α-enolase,细胞色素氧化酶,Na+-K+ATP酶、碳酸酐酶、磷酸果糖激酶、细胞周期相关蛋白、细胞生长因子受体等。
3、干细胞生长微环境:细胞基质影响角膜上皮干细胞的分化。与3T3成纤维细胞共同培养的角膜缘上皮细胞的克隆形成率明显为高,随着细胞的不断传代生长,其克隆形成率无明显变化。但是,传代生长的细胞核质纤维密度降低、核板(nuclear lamina)变薄,核质蛋白(层粘蛋白(lamin)A/C和增殖细胞核心抗原)大部分丧失,同时出现新的蛋白质;在培养晚期细胞表达K3蛋白,说明长期体外生长后角膜缘上皮细胞发生分化。羊膜对角膜缘上皮细胞的影响很明显,去上皮羊膜上可以形成多层角膜缘上皮层,同时促进角膜缘干细胞分化形成瞬时放大细胞。研究显示,角膜缘上皮细胞培养生长于羊膜上后, IL-1α和IL-1β蛋白量表达降低, IL-1ra表达增加,说明羊膜基质可以抑制角膜上皮细胞表达IL-1,减轻眼表炎症反应。
二、结膜干细胞
结膜上皮的完整也是保持眼表面功能的重要因素,研究认为,穹隆部的结膜上皮细胞较之球结膜和睑结膜上皮细胞的增殖力高,并且具有丰富的延缓标志细胞(Label-retaining cells),是球结膜上皮细胞最可能的干细胞来源;穹隆部结膜上皮细胞在TPA的刺激下增殖力提高最明显,而球结膜和睑结膜仅仅提高2.5~5倍,并且在静止条件下穹隆部结膜上皮细胞的3H-TdR标记指数低于球结膜和睑结膜的,是结膜干细胞位于穹隆部结膜的主要证据。
睑缘部(睑皮肤-结膜交界处的灰线内0.4mm)的上皮细胞具有大量的瞬时放大细胞(TAC),不断地分裂增殖并向穹隆部结膜移动,构成了睑结膜上皮干细胞的起源。采用BrdU标记和细胞周期素染色检测发现,睑缘部的瞬时放大细胞最多可分裂6次,从睑缘处起,细胞向穹隆移动的速率为1.7mm/天,从睑缘移动到穹隆部需要6~7天。同样,采用增殖细胞核抗原(PCNA)观察发现,PCNA阳性细胞主要位于睑缘部结膜中,少量散在分布于睑结膜,说明结膜上皮干细胞和瞬时放大细胞位于睑缘部结膜。
无论目前关于结膜干细胞的部位是在穹隆部或睑缘部,在结膜上皮中存在干细胞是肯定的,正确认识结膜干细胞在眼部创伤特别是碱烧伤患者中的重要作用,对临床治疗均具有指导意义。



  • 上篇文章基因工程抗免疫排斥药物在防治角膜移植术后免疫排斥反应的研究进展
  • 下篇文章我国角膜病的基础研究现状(专题总结)
  • 文章搜索:

    第八届全国眼科学术大会 版权所有@ All Rights Reserved
    □- 角膜病热点文章 □- 相关文章
    1. 单疱病毒角膜炎(HSK)的研究进展 [阅读:2855]
    2. LASIK术后的炎症反应及感染 [阅读:2271]
    3. 免疫性角结膜病的治疗学进展 [阅读:1911]
    4. 棘阿米巴角膜炎(Acanthamoeba... [阅读:1904]
    5. 棘阿米巴原虫的病原学研究 [阅读:1802]
    眼表干细胞生物学特性的研究进展