目的 为了进一步探索人神经营养素-4（hNT-4）基因治疗青光眼的新途径，利用基因重组技术将hNT-4亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)，构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)/ hNT-4，基因转染143细胞，鉴定hNT-4的生物活性。

方法 为了构建pcDNA3.1(+)/ hNT-4重组质粒，中间用pBV220载体转换接头。质粒pGEM –T Easy/hNT-4经限制性内切酶EcoR I与BamH I联合消化后，用1% 琼脂糖凝胶电泳法回收0.646Kb hNT-4的基因片段。同样方法回收经EcoR I与BamH I联合酶切的pBV220载体(3.656Kb)。T4 DNA 连接酶连接两个片段，所得质粒命名为pBV220/hNT-4。将经鉴定的pBV220／hNT-4，大小为4.302Kb，用限制性内切酶EcoR I,Sal I消化，琼脂糖凝胶电泳回收片断，大小为0.656Kb片段。酶切真核表达载体pcDNA3.1(+)/ hNT-4，用限制性内切酶EcoR I,Xho I消化，琼脂糖凝胶电泳回收线性化载体，大小为5.399Kb片段。T4 DNA 连接酶连接两个片段，所得质粒命名为pcDNA3.1(+)/ hNT-4，大小为6.055Kb。经鉴定的重组质粒pcDNA3.1(+)/ hNT-4转染143细胞。制备8~9d鸡胚，分离并培养背根神经节(DRG)细胞。加入回收的表达蛋白，培养鸡胚背根神经节DRG细胞，检测hNT-4生物活性。

结果 重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/ hNT-4构建正确，表达框架未发生改变。表达蛋白组可见大量神经突起自神经节组织周缘向四周呈放射状长出，对照组未见神经突起长出。

结论 hNT-4成熟蛋白具有良好的生物活性；研究为进一步开展hNT-4基因治疗青光眼提供了资料。