目的 绿色荧光蛋白基因(green fluorescent protein, GFP)重组腺伴随病毒载体(adeno-associated virus, AAV)质粒的构建、纯化,并以绿色荧光蛋白作为报告基因,观察腺伴随病毒载体介导的绿色荧光蛋白基因对视网膜神经节细胞基因转移作用,为青光眼的基因治疗奠定基础。
方法 制备重组腺伴随病毒AAV-GFP;将纯化的AAV-GFP病毒10µL注射SD大鼠玻璃体内,于一定时间内处死大鼠,取眼球,冰冻切片,荧光显微镜下观察GFP在视网膜神经节细胞表达情况。
结果 注射AAV-GFP后未见鼠眼术后细菌感染及明显免疫反应,在荧光显微镜下可见绿色荧光在视网膜神经节细胞表达。
结论 玻璃体内注射AAV-GFP病毒可在视网膜神经节细胞(RGC)内稳定表达报告基因GFP,AAV载体可望用于青光眼视网膜神经节细胞的基因治疗