目的:评估低分子肝素钠(Fragmin)抑制冷冻后的人视网膜色素上皮细胞(human retina pigment epithelium,hRPE)分泌肝细胞生长因子(human hepatocyte growth factor,HGF)和生长的作用。
方法:体外培养的RPE细胞在-80°C下进行冷冻,冷冻时间为0s、15s和60s,随后继续体外培养(体外实验组)和注入正常兔眼玻璃体(体内实验组)并在第6天时取出一些兔眼的玻璃体液加入到正常RPE细胞培养液中孵育48h;每实验组再分为二个亚组:Fragmin治疗(Fragmin终浓度25ul/ml)组和未治疗组,在3天、6天时收集细胞培养上清和玻璃体样本,ELISA法测定HGF含量,MTT法测定48h后RPE细胞的增殖状态。
结果:在体外实验组,比较未冷冻组,冷冻后的RPE细胞随着冷冻时间延长HGF分泌水平增加(F=27.36,P<0.01),Fragmin干预组HGF分泌水平下降(F=179.50,P<0.01)。在体内实验组(兔玻璃体)随着冷冻时间延长HGF浓度较对照组明显增高(F=6.238,P<0.01),当玻璃体液(冷冻15s和60s,第6天)加入到正常RPE细胞培养液48h后刺激细胞增殖(P<0.01),在Fragmin干预组,细胞增殖明显减弱(F=44.9,P<0.05)。
结论:冷冻可刺激RPE细胞在体外和体内玻璃体环境中HGF的高分泌,且随着冷冻时间增加更为显著,变化后的玻璃体液可促进正常RPE细胞生长,低分子肝素钠Fragmin可降低冷冻后RPE细胞分泌HGF水平和抑制正常RPE细胞生长。