目的 构建人β-神经生长因子（β-NGF）基因重组真核表达载体pcDNA4-β-NGF，为将β-NGF基因转入人及灵长类角膜内皮细胞的实验研究及临床角膜内皮盲的基因治疗奠定基础。方法 人神经生长因子具有强的促进细胞增殖分裂的能力，其β亚基作为其功能基团可独立发挥作用，故又被称为β- NGF，它是由单一外显子编码的。故根据人β-NGF的全长基因序列设计合成特异性引物，保留其前导肽和信号肽序列；从人外周血中提取人基因组DNA并克隆出人β-NGF基因片段；双酶切β-NGF基因片段和载体后，T4DNA连接酶将其插入真核表达载体pcDNA4上，构建成重组真核表达载体pcDNA4-β-NGF；转入JM109菌中扩增后小剂量质粒提取，酶切及序列分析证实插入片段序列正确。结果 PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果显示在750bp处有阳性条带；酶切结果及计算机自动序列分析证实插入片段序列正确。结论 人β-NGF基因重组真核表达载体pcDNA4-β-NGF构建成功，为角膜内皮细胞的转基因研究及临床角膜内皮盲的基因治疗提供可能。