目的 建立Long Evans大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)体外培养的方法,为RGCs的体外实验研究奠定基础。
方法 出生后1-3天的Long Evans大鼠视网膜神经上皮层,胰蛋白酶+透明质酸酶消化制成单细胞悬液,用DMEM培养液(Dulbecco’s Modified Eagle,s Medium)进行培养,观察细胞生长规律,图象分析系统分析有突起的RGCs数目、胞体面积和最长的突起长度,Thy1.1单克隆抗体和微管相差蛋白2多克隆抗体荧光双标法鉴定RGCs。
结果 Long Evans大鼠RGCs体外培养存活4天;培养48h与24h比较,有突起的RGCs增多(P<0.01),胞体面积增大(P<0.01),突起增长(P<0.01)。培养72h与48h比较,有突起的RGCs无明显增多,胞体面积增大(P<0.05),突起增长(P<0.01)。培养96h与72h比较,有突起的RGCs减少(P<0.01),胞体面积变小(P<0.01),突起变短(P<0.01)。荧光双标显示RGCs纯度为80%-90%。
结论 在普通培养基中Long Evans大鼠RGCs体外培养能获成功。胰蛋白酶+透明质酸酶联合消化较单独用胰蛋白酶消化效果好