视网膜疾病占重症眼病的一半以上，对重度损伤尚无很好的治疗方法，许多病例因未能及时治疗或无药可救而导致视力下降甚至失明，因此寻找更好的治疗方法对于治疗视网膜疾病至关重要。
干细胞工程的研究为视网膜损伤的治疗提供了一种新的途径，本研究为证实MSC可以在正常视网膜分化为视网膜结构，用Y染色体鉴定、绿色荧光蛋白标记（GFP）和DAPI标记三种检测方法证明了MSC可在正常和激光损伤大鼠视网膜原位分化为多层的视网膜样结构，包括视网膜色素上皮层、视椎视杆细胞层、双极细胞层及视细胞层。视网膜结构完整，未见到玫瑰花结样结构。
在用Y染色体原位杂交和绿色荧光蛋白标记证明了MSC的存在后，本研究又在视网膜下移植后10、20、35和50天观察了视网膜MSC-DAPI的分布情况。MSC在正常视网膜分化有以下特点：①阳性细胞随着移植时间的延长，阳性细胞所在的部位先扩大，后缩小，50天阳性细胞范围比35天明显缩小；②阳性部位的细胞分布较特殊：有的外核层阳性在外核层的最外层，内核层阳性在内核层的最内层。③观察到50天为止，未发现DAPI阳性细胞参与或导致视网膜的增生，也未发现细胞层的增厚。对以上各时间点的MSC-DAPI冰冻切片进行了NeuN、NSE、、GFAP及CK的免疫组化染色。结果表明阳性细胞在移植之初已经有部分细胞表达了NeuN和NSE等神经细胞表面标志，同时也观察到GFAP和CK在视网膜的正常表达。观察到50天为止，未发现GFAP和CK的过表达。这些结果说明了MSC可在正常大鼠视网膜下分化为视网膜结构。
本研究对MSC在损伤大鼠视网膜下有阳性细胞的切片进行上述蛋白的免疫组化染色。结果表明：与正常组相比，MSC在损伤视网膜分化有如下特点：①阳性细胞随着移植时间的延长，范围从移植部位向周围部位不断扩大，而且10天观察便发现细胞向损伤部位的迁移，50天未发现阳性细胞分布减少（阳性细胞4个时间点分布范围分别为1120μm、1920μm、1600μm及1480μm）；②阳性细胞在移植之初分层不明显，随时间延长分层逐渐清晰；③ 阳性部位的细胞除与正常组分布规律相似而呈层状分布外，在损伤视网膜中阳性细胞参与了RPE层的损伤恢复性增生。这说明MSC的移植并不能完全阻止损伤愈合过程中的组织增生。④ 损伤50天出现了节细胞层的增生，正常移植组中未发现节细胞层增厚的现象。⑤免疫组化结果显示，新形成的视网膜组织化学染色存在着差异。综合DAPI观察可以发现，MSC在视网膜下移植后有一部分参与了视网膜的重建，一部分参与了损伤的增生，还有一部分形成了新的节细胞层增生。
对50天损伤对照组和损伤移植MSC组切片进行了HE染色，结果表明说明MSC的参与可以缓解激光对视网膜损伤后的瘢痕形成，视网膜的各层未发现断裂，但排列仍不整齐，分层也不明显。
本研究对损伤组和移植组视网膜进行了视网膜电图（ERG）b波的记录，结果表明，MSC移植组的波幅值在6~7周高于对照组（P<0.05），这一结果可以间接说明新形成的视网膜具有一定的视功能。结合DAPI观察结果，10天时发现了阳性细胞向损伤部位的迁移，可以推测新分化成的细胞参与了损伤部位视网膜的重建，进而促进了视功能的恢复。
关键词：骨髓间充质干细胞 视网膜 激光 分化 细胞移植