目的: 探讨阿魏酸钠、五味子乙素、枸杞多糖三种天然抗氧化剂单体对实验性晶体氧化损伤所致晶体上皮细胞(LEC)凋亡及凋亡相关基因表达的影响,同时研究其作用的分子和细胞学机制。为从祖国医药中寻求防治白内障的有效药物提供实验依据。
材料及方法:
将透明SD大鼠晶体温育在含有300mmol/l H2O2的Medium199培养液中复制LEC凋亡模型,同时分别加入上述天然抗氧化剂单体共同孵育24h,取晶体前囊膜以TUNEL法检测LEC凋亡率、免疫组化法检测凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达、透射电子显微镜观察LEC超微结构变化。
结果:
1、阿魏酸钠组、五味子乙素组、枸杞多糖组LEC凋亡率分别为20.80±3.03、13.80±3.27、16.60±8.11。三者与H2O2组均有非常显著差异(t值分别为40.18、42.16、18.38,P值均<0.01);经F检验(F=175.08),三种药物组均与白内停组有显著差异,三者之间差异不显著。
2、正常SD大鼠LEC中 Bcl-2表达远较Bax表达强。H2O2组Bcl-2表达显著下调,Bax表达显著上调(Ridit检验,R值分别为0.97和0、P<0.01,均有非常显著差异),Bcl-2/Bax比率下降。三种天然抗氧化剂均明显上调Bcl-2表达,下调Bax表达(与H2O2组比较,P值均<0.01,有非常显著差异),Bcl-2/Bax比率上升;各药物组之间无显著差异(P值均>0.05)。
3、电子显微镜下见H2O2组绝大多数LEC均处于细胞凋亡的各阶段,即从染色质开始凝集到凋亡小体形成、凋亡小体脱落、凋亡细胞继发性坏死的整个动态发展的过程。三种天然抗氧化剂组多数LEC形态改变轻微,表现为部分线粒体水肿,脂滴多少不等,细胞间隙增宽。
结论
天然抗氧化剂可明显抑制LEC凋亡,其分子机制可能与调控凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达有关。从祖国医药中寻求防治白内障的有效药物具有广阔的前景。