目的 合成光感受器间维生素A类结合蛋白(interphotoreceptor retinoid-binding protein, IRBP)的第1177-1191氨基酸残基,即R16多肽片段,并探讨其致葡萄膜视网膜炎活性。
方法 应用Fmoc化学合成法合成并纯化IRBP R16多肽片段,将30μg多肽抗原联合佐剂免疫Lewis大鼠,以诱导实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎(EAU)模型。每天观察EAU临床表现,进行临床分级。在炎症高峰期摘取大鼠眼球,制作病理切片,进行EAU的病理分级。用酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测EAU高峰期血清细胞因子γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)水平,以及房水IL-2水平。培养EAU大鼠的引流淋巴结细胞,测定淋巴细胞增殖反应,以评价抗原特异性T细胞的增殖水平。
结果 合成的IRBP R16多肽片段纯度为95.6%。应用IRBP R16多肽片段免疫Lewis大鼠,可以成功地诱发出实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎。炎症的高峰期为免疫后第14.33±0.52天,EAU的临床分级为3.33±0.61级,病理分级为3.67±0.92级,其病理特征为以淋巴细胞浸润为主的全眼球炎。血清ELISA分析表明,与对照组比较,IRBP R16多肽片段诱导的EAU中,Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2升高,Th2型细胞因子IL-4与对照组相比无显著差异;房水IL-2水平也同时升高。淋巴细胞增殖反应增强,刺激指数(SI)为7.05±3.77。
结论 IRBP R16多肽片段具有重要的生理功能和强烈的致葡萄膜视网膜炎活性,其诱导的EAU以Th1型细胞因子水平升高为主,抗原特异性淋巴细胞增殖反应增强。IRBP R16多肽诱导的EAU为我们研究人类葡萄膜视网膜炎提供了一重要的动物模型。