目的:粘蛋白Ⅰ型是一种重要的保护型粘蛋白,对于多种细胞组织及器官都具有不可替代的抗损害作用。人们已经在角膜上皮检测到粘蛋白Ⅰ型的表达,但迄今为止尚未有人发现在角膜内皮中表达。本实验想通过多种分子生物学手段,检测粘蛋白Ⅰ型是否在人角膜内皮中表达,探讨粘蛋白Ⅰ型对角膜内皮的保护功能。
方法:
应用RT-PCR及原位杂交技术(In Situ Hybridizatin)检测人角膜内皮中是否表达粘蛋白Ⅰ型的mRNA;应用Western blot检测人角膜内皮中是否表达粘蛋白Ⅰ型蛋白;应用免疫组化检测人角膜内皮是否有粘蛋白Ⅰ型的显示;每一步检测都以角膜上皮为参考,对照两组粘蛋白Ⅰ型的不同含量。
结果:
无论RT-PCR还是原位杂交技术均检测到粘蛋白Ⅰ型在人角膜内皮细胞中mRNA的表达,免疫组化技术检测到粘蛋白Ⅰ型在角膜内皮的显示,Western blot技术检测到人角膜内皮中亦表达粘蛋白Ⅰ型蛋白。
结论:
各种技术的应用显示粘蛋白Ⅰ型虽然在角膜内皮只是微量表达,较角膜上皮表达量少,但其表达确实存在。它对角膜内皮的保护功能不可替代,其中的抗黏附功能对角膜内皮的泵功能的维持尤其重要。本研究为探讨角膜内皮的再生机制提供了可靠的理论依据。对临床医师防治角膜内皮失代偿疾病、开展角膜内皮移植新方法的尝试也具有良好的参考价值。