目的 1．观测阳离子脂质体 LipofectamineTM2000/Bcl-Xl 对人角膜基质细胞的影响；2．检测 Bcl-Xl/LipofectamineTM2000 复合物中两者比值对其转染人角膜基质细胞细胞效率的影响，探讨其用于人角膜基质细胞基因转染的最佳比值，同时观察在人角膜基质细胞中表达的时间规律。
方法 体外培养人角膜基质细胞，取第3~5代细胞鉴定后用于实验。1．采用四氮唑盐代谢法，分别检测LF2000和Bcl-Xl质粒载体对培养的人角膜基质细胞增殖的影响与其浓度和作用时间的关系；采用台盼兰染色法，分别检测脂质体LF2000和质粒载体Bcl-Xl对存活率的影响与其浓度和作用时间的关系。2．选择Bcl-Xl/ LF2000不同比值制备载体复合物转染人角膜基质细胞，转染时间24 h。在转染后3天，采用定量RT-PCR检测目的基因Bcl-X1 mRNA表达的变化；采用免疫组织化学染色法及流式细胞计数法检测目的基因Bcl-X1表达阳性细胞率。3．选择Bcl-Xl/ LF2000比值1：8制备载体复合物转染人角膜基质细胞，转染时间24 h。在转染后1d~15d，采用定量RT-PCR及免疫组织化学染色法检测目的基因Bcl-X1表达阳性细胞率，观察目的基因在角膜基质细胞中表达的时间变化规律。
结果 1．脂质体LF2000及质粒Bcl-Xl在浓度高于一定水平时可以引起细胞增殖和存活率的下降。LF2000在浓度40µg.ml-1以下作用24h不会对细胞增殖和存活率产生影响； Bcl-Xl在浓度20µg.ml-1以下作用24h不会对细胞增殖和存活率产生影响。2．LF2000能有效介导外源基因Bcl-Xl转染人角膜基质细胞。定量PCR显示1:8组mRNA表达水平高于其他组；Bcl-X1免疫组化染色及流式细胞计数法均显示1:8组转染效率最高。3．Bcl-X1免疫组化染色及流式细胞计数法均显示：在转染后1d开始检测到Bcl-X1表达阳性细胞，阳性率在转染后3d最高(48.3%)，此后逐渐降低，转染后15d有少量细胞仍表达Bcl-Xl基因。
结论LipofectamineTM2000能有效介导外源基因Bcl-Xl转染人角膜基质细胞，在一定浓度范围内可以达到相当高的效率而不引起细胞毒性。