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脱细胞角膜基质为支架构建组织工程角膜上皮的实验研究         
脱细胞角膜基质为支架构建组织工程角膜上皮的实验研究
作者:房兴峰  … 文章来源:山东省眼科研究所 266071 点击数:957 更新时间:2006/7/7 10:56:54
目的 比较角膜组织脱细胞的两种新方法,探讨以去细胞角膜基质为支架构建组织工程化角膜上皮的可行性。 方法 分别用NaCl-SDS-胰蛋白酶法和Dispase-Triton-X-100法处理兔角膜组织,用裂隙灯显微镜和组织病理学方法观察经两种化学方法处理后,角膜基质的特性和脱细胞效果。刮除角膜上皮,以显微角膜刀切取猪角膜前弹力层/基质(厚度为150μm),用Dispase-Triton-X-100法作脱细胞处理。组织块培养法培养兔角膜上皮细胞,取兔角巩膜缘上皮组织接种于猪角膜去细胞后的前弹力层/基质支架上,体外重建兔角膜上皮细胞层,并进行形态学、组织病理学和免疫组织化学检测。 结果 NaCl-SDS-胰蛋白酶法和Dispase-Triton-X-100法处理过的兔角膜基质大体形态相似,均呈灰白色不透明状,水肿明显,质地柔软,但后者柔韧性优于前者。组织病理学观察两种方法处理的兔角膜胶原排列规整,但是NaCl-SDS-胰蛋白酶法处理的角膜保留了部分基质细胞及细胞碎片,而Dispase-Triton-X-100处理的角膜未见基质细胞及细胞碎片。两种方法处理后经甘油脱水的角膜基质透明度均提高,厚度变薄,直径变小。以Dispase-Triton-X-100法处理猪角膜前弹力层/基质,结果与兔角膜发生相似的变化。兔角膜缘上皮组织块接种于脱细胞后的猪角膜前弹力层/基质上,24小时后,角膜上皮细胞开始游出,呈圆形或椭圆形,透亮,贴壁后呈不规则多角形,3-4天开始融合呈片状,7-8天形成单细胞层。免疫组化检测发现,角膜上皮细胞表达特异性角蛋白CK3与生理状态下相同。 结论 利用Dispase-Triton-X-100法处理角膜组织脱细胞比较完全,胶原纤维排列规整,是一种良好的角膜去细胞方法。以脱细胞后的猪角膜前弹力层/基质为支架,培养角膜缘上皮细胞,可在体外构建组织工程化角膜的上皮组织。
会议投稿录入:aya610    责任编辑:毛进 
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