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|您的位置>>会议投稿查询>>研究方法(投)>>蛋白激酶Cα对小鼠胚胎干细胞定向分化中的发育基因表达作用的研究[基础研究] 发送给好友  发表评论,已评论0次   阅读:598次 关键词:胚胎

 
   [作者]: 葛坚 高前应 王智崇 陈慧怡 黄丹平 袁钊辉 [单位或文章来源]: 广州中山大学中山眼科中心 510060 [加入时间]:2003/7/8 [稿件录用方式]: 书面交流
  蛋白激酶Cα对小鼠胚胎干细胞定向分化中的发育基因表达作用的研究   
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目的:探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对小鼠胚胎干细胞(ES细胞)定向诱导分化中发育基因(pax-6、slit-2、netrin-1)表达的影响。
方法:ES-BALB/c细胞株用无mLIF的ES细胞培养液培养4天,形成胚胎体,再分别种植于预置有盖玻片的6孔板和直径100mm的培养皿,经5×10M视黄酸(RA)诱导后,用nestin和NF-200来鉴定分化细胞的类型,在诱导后第1、3、5、7和14天用逆转录聚合酶链(RT-PCR)方法测定细胞的PKCα和发育基因的mRNA表达情况,并观察了PKC激活剂佛波酯(PMA)和PKC抑制剂D-鞘氨醇对它们表达的影响。
结果:免疫组化发现在诱导后第3天大多数细胞nestin和NF-200染色阳性,RT-PCR证实诱导后第1天PKCα、pax-6和netrin-1的mRNA表达急剧下降,第3-7天逐渐升高,至第14天恢复至正常水平,而slit-2在诱导前后均无明显表达。PMA可使PKCα、pax-6、netrin-1的mRNA在诱导后细胞中的表达增强,而D-鞘氨醇的作用相反,使它们的表达明显降低,而对slit-2无明显影响。
结论:发育基因pax-6、netrin-1在ES细胞定向分化为神经样细胞中有重要的调控作用,可能是通过PKCα信号通路起作用,其机制还有待于进一步的研究。



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