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BMP7对转基因小鼠晶状体细胞作用的研究 |
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作者:苑晓勇 陈… 文章来源:天津医科大学眼科中心 300070 点击数:2004 更新时间:2006/3/2 9:53:54
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目的:白内障是目前国内最重要的致盲眼病,与晶状体细胞的发育关系密切,了解发育信号分子对晶状体细胞的作用,对于了解晶状体细胞的发育规律,进而揭示白内障的发生有重要意义。本研究利用晶状体特异性表达蛋白A-晶状体蛋白的启动子驱动人BMP7,制备了在晶状体特异性表达人BMP7的转基因小鼠模型,以进一步了解小鼠晶状体基本发育完全时(P20、P30)转基因BMP7对小鼠晶状体细胞的作用。
方法:采用DNA重组技术构建转基因A-BMP7,经质粒载体大量扩增、酶切、胶分离及纯化等分子生物学技术获得目的基因片段,采用显微注射法制备A-BMP7转基因小鼠模型,PCR和斑点杂交检测小鼠转基因的整合,原位杂交检测转基因表达,病理证实白内障发生,TUNEL检测晶状体细胞凋亡,免疫组化检测Caspase 3、Cyclin B1、Cyclin D1及钙粘连素E的表达。
结果:
1.构建A-BMP7转基因,经酶切和测续验证无误,获得显微注射片段。
2.采用显微注射法将A-BMP7转基因注入FVB/N小鼠受精卵内,原核注射和细胞质注射组均获得转基因小鼠,并经PCR、斑点杂交验证转基因整合,原位杂交、晶状体表现及病理验证其表达。
3.Caspase 3介导转基因小鼠P20、P30大量晶状体细胞凋亡。
4.转基因小鼠P20、P30晶状体增殖区上皮细胞和部分纤维细胞Cyclin D1表达阳性,对照小鼠晶状体表达阴性,提示转基因BMP7导致该部位细胞进入G1早期;而转基因小鼠与正常对照小鼠晶状体对Cyclin B1表达差异不明显,提示转基因BMP7并未导致晶状体细胞G2/M异常。
5.转基因小鼠P20、P30晶状体上皮细胞钙粘连素E阳性表达,而纤维细胞阴性表达,与正常对照小鼠晶状体对钙粘连素E表达部位相一致,提示转基因BMP7并未明显改变上皮的属性。转基因小鼠P30前囊下上皮细胞表达钙粘连素E强度较对照降低,可能由于大量细胞凋亡导致,并参与白内障的形成。而P20转基因小鼠和正常对照表达差异不明显。
结论:转基因BMP7导致的晶状体细胞凋亡直接参与白内障发生;其造成的晶状体增殖区上皮细胞和某些纤维细胞进入G1早期,影响晶状体细胞正常的细胞周期,也与白内障生成有关;转基因BMP7导致钙粘连素E在A-BMP7转基因小鼠P30前囊下晶状体上皮细胞表达下调,与白内障发生可能互为因果。
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会议投稿录入:aya610 责任编辑:毛进 |
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