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| 混合晶状体蛋白对鼠RGCS保护及视神经轴突再生作用的在体研究 |
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作者：刘志敏 … 文章来源：重庆 第三军医大学西南眼科医院400038 点击数：1584 更新时间：2005/6/30 16:02:47 
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| 目的：在体实验研究混合晶状体蛋白对完全视神经损伤的视网膜神经节细胞的保护作用及不完全视神经损伤的轴突再生作用。
方法：1）建立视神经完全损伤模型，于视神经切断前7天经上丘及外侧膝状体逆行标记视网膜神经节细胞。将成年Long evens大鼠25只，随机分成4组，分别为伤后1,2,3周组和正常对照组，前三组每组7只，正常对照组4只。首先用标记好的4只大鼠8只眼的视网膜铺片获得正常成年Long evens视网膜神经节细胞密度。右眼经玻璃体腔注射浓度为1x10-4g/l的混合晶体蛋白5ul，左眼注射生理盐水5ul，分别于伤后1，2，3周对实验动物进行灌注，挖出眼球，将前节去除，揭取视网膜作全视网膜铺片，于荧光显微镜下进行观察和RGCS.记数。2) 建立视神经夹伤模型，将成年Long evens大鼠40只，随机分成4组，分别为伤后1，2，4，8周组，每组10只。右眼经玻璃体腔注射浓度为1x10-4g/l的混合晶状体蛋白5ul，左眼注射生理盐水5ul，分别于损伤即刻、伤后一周，取材前一周进行注射。分别于伤后1，2，4，8周对实验动物进行灌注、取材，取材前两天每组5只大鼠进行WGA顺行标记，标记过的视神经标本进行冰冻切片、免疫组化染色，另外5只大鼠的视神经标本作电镜观察，观察轴突存活及再生情况。
结果：1.正常Long evens大鼠RGCS数为2376±216个/mm2，视神经切断伤后1-2周RGCS数迅速下降，玻璃体腔注射生理盐水组于在视神经切断伤后1周时下降到1663±136个/mm2，为正常值的70.5％；视神经切断伤后2周下降到757±89个/mm2，为正常值的31.9％，三周时下降到351±67个/mm2，为正常值的14.8％。玻璃体腔注射混合晶体蛋白组在视神经切断伤后1周RGCS数下降到1869±158个/mm2，为正常值的78.7％；2周时RGCS数下降到940±102个/mm2，为正常值的39.6％；3周时RGCS数下降到456±56个/mm2，为正常值的19.2％，均显著高于对照组（P<0.05）。2.视神经再生结果：2.1病理改变：伤后1-2周损伤区呈急性炎症反应，4-8周出现胶质瘢痕，损伤远端轴突变性崩解，轴突变性随着存活时间延长及距离损伤点距离增加而加重，轴突数目进行性减少。玻璃体腔注射晶体蛋白眼损伤远端变性程度明显轻于对照眼存有较多的神经纤维。对照眼仅在2mm可见散在无髓鞘神经纤维，而玻璃体腔注射晶体蛋白眼于损伤点后6mm仍可见无髓鞘神经纤维。2.2视神经夹伤后1周玻璃体腔注射晶状体蛋白眼开始表现出轴突再生，对照眼未表现轴突再生；视神经夹伤后2周玻璃体腔注射晶状体蛋白眼轴突再生进入损伤区，部分轴突通过损伤区，对照眼少量轴突再生进入损伤区，轴突长度较短；视神经夹伤后4周玻璃体腔注射晶状体蛋白眼轴突再生通过损伤区，开始向远端生长，对照眼少量轴突再生未通过损伤区；视神经夹伤后8周玻璃体腔注射晶状体蛋白眼轴突再生继续向远端生长，对照眼少量轴突再生通过损伤区。
结论：1.Long evens大鼠视神经切断伤后RGCS的死亡主要发生在7－14天。视神经切断伤后玻璃体腔注射混合晶体蛋白能够保护RGCS防止死亡，这种作用可以持续到切断伤3周以后。2.视神经夹伤后玻璃体腔注射可溶性混合晶状体蛋白能够促进轴突再生。
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| 会议投稿录入：aya610 责任编辑：毛进 |
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