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| bHLH信号家族成员Mash1、NeuroD在胚胎干细胞分化过程中的动态表达及意义 |
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作者：肖迎 唐… 文章来源：广东 中山大学中山眼科中心 510060 点击数：1491 更新时间：2005/6/29 15:29:53 
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| 目的：探讨在维甲酸（RA）诱导胚胎干细胞（ESC）向神经细胞定向分化及ESC自由分化的过程中，bHLH信号家族成员Mash1及NeuroD蛋白和mRNA的动态表达以及RA对其表达的影响。
方法：实验分为2组：实验组加入RA对ESC进行向神经细胞的定向诱导分化，对照组ESC进行自由分化。每组再分为ESC、分化1d、3d、5d、7d、9d共6个时间点。倒置相差显微镜观察细胞形态变化，免疫细胞荧光化学法观察分化细胞MAP-2的表达情况。流式细胞术检测实验组及对照组分化9天时的Rhodopsin阳性细胞率，流式细胞术及逆转录-聚合酶链反应分别检测各组不同时间点Mash1及NeuroD蛋白和mRNA的表达情况。
结果：实验组随着RA诱导时间延长，MAP-2阳性神经细胞逐渐增多，并形成密集的神经网络结构。对照组分化的细胞以圆形上皮样细胞为主，MAP-2阳性神经细胞较少。分化9天时实验组Rhodopsin阳性感光细胞率（2.70%±0.89%）显著高于对照组（0.37%±0.21%）(P<0.05)。在ESC阶段，Mash1、NeuroD的蛋白和mRNA均有相对较低的表达水平，实验组加入RA诱导分化后，Mash1、NeuroD的蛋白和mRNA水平均迅速增高并在诱导分化后1天达到最高水平，随后逐渐下降。自由分化后，Mash1、NeuroD的蛋白和mRNA水平也有提高，但在分化后第3天才达到最高水平，随后下降。实验组各时间点Mash1蛋白表达水平与对照组无显著性差异(P>0.05)，Mash1 mRNA仅在分化1d和9d时高于对照组(P<0.05)。而实验组NeuroD蛋白和mRNA的表达水平在诱导分化后的大部分时间点内均显著高于对照组(P<0.05)。
结论：在ESC向神经细胞的诱导分化及自由分化过程中， bHLH家族成员Mash1、NeuroD迅速激活，使ESC有可能在局部微环境内诱导因素的作用下向视网膜特异性神经元，尤其是感光细胞分化发育。RA可以促进Mash1、NeuroD表达高峰的提前，并可显著提高NeuroD的表达水平，对ESC向视网膜感光细胞的特异性分化有重要的促进作用。但RA单独作用下，视网膜感光细胞的分化效率极低，可能需要复杂眼内微环境的支持。
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| 会议投稿录入：aya610 责任编辑：毛进 |
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