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| 用RNAi技术抑制大鼠角膜基质细胞MHCⅠ表达的试验研究 |
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作者：陈家祺 … 文章来源：广东 中山大学中山眼科中心 510060 点击数：1320 更新时间：2005/6/14 16:20:06 
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| 目的 探索用RNAi技术抑制细胞表达角膜移植排斥反应中的重要分子－MHCⅠ的策略及其效果。为用该技术抑制角膜移植术后排斥反应提供研究基础。【方法】分离并培养SD大鼠的角膜基质细胞。克隆其β2m基因并进行测序。设计并合成针对该序列的SiRNA共5对。SD大鼠的角膜基质细胞经上述SiRNA转染后在分别用γ干扰素刺激之后，用real-time PCR检测β2m和MHCⅠ的mRNA的表达水平，用流式细胞技术检测MHCⅠ蛋白在细胞膜表面的表达水平，并用激光共聚焦显微镜进行细胞的活体观察。对剩余的经转染的细胞继续培养观察。【结果】5对SiRNA均在不同程度上对β2m在mRNA水平产生抑制效果，最高可达70%以上。对MHCⅠ在mRNA水平无明显抑制效果，但在能在蛋白质水平抑制MHCⅠ的正常表达，其程度与β2m的抑制程度相一致。激光共聚焦显微镜下对照组细胞呈明亮红色戒指状，而经SiRNA传染后的细胞仅表达散在、不连续的微弱荧光。经转染的细胞继续培养观察未发现形态学和生长异常。【结论】使用RNAi技术能有效抑制β2m基因的表达和MHCⅠ抗原蛋白在细胞膜上的正确表达。通过抑制β2m基因的表达而最终抑制MHCⅠ的表达的策略能够克服MHCⅠ的多态性造成的SiRNA设计和合成困难。β2m仅影响MHCⅠ蛋白的组装和正确折叠，而不影响其蛋白的表达数量。用RNAi抑制β2m基因和MHCⅠ蛋白的正确表达后，细胞仍能正常生长。
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| 会议投稿录入：aya610 责任编辑：毛进 |
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