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| 固相杂交快速检测真菌性角膜病常见致病菌种的初步研究 |
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作者：张英朗 王… 文章来源：河南省眼科研究所 点击数：1008 更新时间：2005/6/14 15:11:38 
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| 目的 建立一种采用固相杂交技术对真菌性角膜病常见致病菌种进行快速、准确检测和鉴定的实验方法。方法 根据流行病学调查，对5属10种真菌性角膜病常见致病菌（腐皮镰孢菌、串珠镰孢菌、梨状镰孢菌、烟曲霉菌、黄曲霉菌、黑曲霉菌、土曲霉菌、新月弯孢菌、牵连青霉菌、白色念珠菌）标准菌株，异硫氰酸胍裂解法提取样本DNA。 应用基因序列比对和引物设计软件，筛选设计一对通用引物，对下游引物进行5′端TAMRA荧光标记。在同一PCR 反应体系中，对上述真菌含部分18S、全部ITS1、5.8S、ITS2和部分28SrDNA的基因片断进行扩增，在GenBank 进行BLAST查询，选取该区域内特异性最好的寡核苷酸序列合成探针,并进行3′端氨基化修饰。将10种真菌相关探针点样于醛基化载玻片上，在探针排列的载玻片区域加入杂交反应液和PCR扩增产物进行杂交，置于荧光显微镜下观察显色情况。结果 通过琼脂糖凝胶电泳观察，10种真菌都产生了约为340-410bp 的PCR扩增产物，在相同的条件下对其进行杂交检测，得到了具有各自特征的杂交后荧光显色图谱，通过荧光信号可直接从杂交显色图谱上对不同菌种区分判断。结论 采用荧光标记的通用引物，通过不对称PCR扩增，产生带有荧光标记的扩增产物，以醛基化玻片为载体，与特异性寡核苷酸探针固相杂交，能够在3-4小时内完成对我国临床上常见的10种角膜致病真菌的菌种鉴定。
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| 会议投稿录入：zhangyl 责任编辑：毛进 |
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