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| 人β-神经生长因子基因转染体外培养猫角膜内皮细胞促其分裂再生的实验研究 |
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作者：李东侃 … 文章来源：厦门眼科中心 361001 点击数：1545 更新时间：2004/6/17 
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| 目的 ：脂质体介导将人β-神经生长因子基因转染到体外培养的猫角膜内皮细胞中，证明该基因在体外培养的猫角膜内皮细胞中能够表达并具有促进该细胞分裂再生的作用。方法 ：一、从正常人血基因组DNA中克隆出人β-NGF基因，构建真核表达载体，并于感受态细胞中扩增，酶切鉴定及计算机自动序列分析证明该基因为目的基因。二、组织块培养法简捷、快速体外培养出纯净的猫角膜内皮细胞单层。三、EffecteneTM脂质体介导将pcDNA4-β-NGF重组真核表达载体转染到体外培养的猫角膜内皮细胞中，通过报道基因的表达来确定转染效率， RT-PCR、人β-NGF单克隆抗体的免疫组织化学染色方法分别在基因水平和蛋白水平检测目的基因的表达情况。四、转基因后48-96小时间测猫角膜内皮细胞的MTT值，细胞有丝分裂指数分析，流式细胞仪测定处于G1期的细胞比例，制作体外培养猫角膜内皮细胞的定量损伤模型，统计学分析转染人β-NGF基因对猫角膜内皮细胞DNA合成的影响和对猫角膜内皮细胞定量损伤后愈合的影响。结果 ：一、从正常人血基因组DNA中能克隆出人β-NGF基因。二、组织块法可简单、方便培养出纯净的细胞单层。三、EffecteneTM脂质体可介导重组真核表达载体pcDNA4-β-NGF转染体外培养的猫角膜内皮细胞，转染效率为11.3% ，RT-PCR及人β-NGF单克隆抗体免疫组织化学染色表明该基因在猫角膜内皮细胞中能够得以表达。四、转染β-NGF基因后48－96小时，猫角膜内皮细胞的MTT值，细胞有丝分裂指数，流式细胞仪测定的G1期细胞比例及猫角膜内皮细胞定量损伤后的愈合情况，经SPSS10.0软件包中聚类分析组间联结方法行统计学分析处理，证明β-NGF基因可在体外培养的猫角膜内皮细胞中发挥其促进细胞分裂再生的作用。结论： EffecteneTM脂质体可介导人β-NGF基因转染体外培养的猫角膜内皮细胞，并促进该细胞的分裂再生，旨在为进一步将此基因转入人角膜内皮细胞的研究奠定理论基础，为临床解决“角膜内皮不能再生”的难题提供新思路。
关键词：
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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