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利用Cre/LoxP系统构建TIGR、OPTN基因时空特异性打靶载体         
利用Cre/LoxP系统构建TIGR、OPTN基因时空特异性打靶载体
作者:魏雁涛 高… 文章来源:中山大学中山眼科中心 510060 点击数:1921 更新时间:2004/6/15
目的 利用Cre/LoxP系统构建TIGR、OPTN基因时空特异性打靶载体; 方法 在通用型时空特异性打靶载体pflox的基础之上,利用分子克隆技术,将TIGR、OPTN基因组序列C端功能域置于两个方向相同的LoxP序列之间,将其5’端和3’端序列作为5’同源长臂和3’同源短臂,将neo、tk正负筛选基因置于内含子中,从而避免筛选基因干扰TIGR、OPTN基因转录后拼接;结果 经限制性内切酶、PCR、测序鉴定,确定构建了5’同源长臂为3.6kb,3’同源短臂为2kb,第三外显子位于两个loxP序列之间的TIGR基因时空特异性打靶载体, 以及5’同源长臂为2.5kb,3’同源短臂为2.7kb,第四、五外显子位于两个loxP序列之间的OPTN基因时空特异性打靶载体。结论 利用Cre/LoxP系统成功构建了TIGR、OPTN基因时空特异性打靶载体,为进一步构建TIGR、OPTN基因时空特异性基因敲除小鼠奠定基础。 本课题获国家自然科学基金(30300380)、广东省自然科学基金重点项目(36649)、广东省教委基金资助
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