| 【摘要】目的 探讨Vogt-小柳-原田（Vogt-Koyanagi-Harada,VKH）病患者外周血CD4+CD25high调节性T（Treg）细胞比例、表型和抑制功能。方法 采集30例活动期、19例静止期VKH病患者及29名健康人外周血。分离外周血单个核细胞（PBMC），用四色流式细胞术检测CD4+CD25highTreg细胞的比例以及FOXP3，CD45RO，CTLA-4和GITR表型，采用MACS或FACS方法分选出CD4+CD25highTreg细胞和CD4+CD25-T细胞，CD4+CD25highTreg细胞和CD4+CD25-T细胞以1：1共同培养6天，用3H掺入法检测细胞增殖。用ELISA方法检测培养上清中IFN-g、IL-13、IL-17和IL-10水平。结果 活动期VKH患者外周血CD4+CD25high Treg（1. 19±0.38%）显著低于健康对照组（1.91±0.51%，P=0.002）和静止期VKH患者（1.82±0.41%，P=0.010），CD25high的平均荧光密度同样降低。VKH患者和健康人CD4+CD25high/low/-细胞亚群中，CD25high表达FOXP3、CD45RO、CTLA-4和GITR水平最高，但VKH活动期患者CD4+CD25highFOXP3+Treg（1.06±0.28%）显著低于健康人（1.83±0.48%，P<0.001）和静止期VKH患者（1.69±0.40%，P=0.002）。活动期VKH患者CD25-T与自体CD25high细胞共同培养时检测的cpm值（9588.5±1475.5）显著高于健康人（3475.25±1142.40， p<0.001）和静止期VKH患者（4435.5±1585.8，p=0.001）。活动期VKH患者CD25-细胞培养上清中IFN-g的水平（1928.5±232.3pg/ml）高于健康人（1130.8±220.4pg/ml,p<0.001），CD25-与CD25high 共同培养上清中IFN-g的水平（1261.3±200.9pg/ml）显著高于健康人（349.0±66.6pg/ml,p<0.001）。活动期VKH患者CD25-细胞培养上清中IL-13的水平（365.82±78.8pg/ml）与健康人（320.2±83.6pg/ml）无显著差异（p=0.730）， CD25-与CD25high 共同培养上清中IL-13的水平（172.78±35.2pg/ml）显著高于健康人（109.72±25.7pg/ml,p=0.018）。活动期VKH患者CD25-细胞培养上清中IL-17的水平（38.9±7.35pg/ml）显著高于健康人（23.5±5.61pg/ml,p=0.008），CD25-与CD25high 共同培养上清中IL-17的水平（41.12±10.79pg/ml）与健康人（29.2±8.80pg/ml）无显著差异（p=0.179）。结论 VKH病患者CD4+CD25highTreg细胞比例下调，CD4+CD25high细胞能够抑制自体CD25-细胞的增殖及细胞因子IFN-g和IL-13产生，但其抑制功能显著低于健康人。活动期VKH患者CD25highT细胞抑制功能的下调可能与FOXP3表达及CD25分子密度下调有关。CD25highT细胞对共同培养的CD25-细胞IL-17产生没有明显的促进和抑制作用，提示CD25highT细胞在体内可能通过抑制Th1和Th2细胞因子，或通过与炎症因子IL-6协同促进IL-17产生。 |
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