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| 人视网膜色素上皮细胞氧化损伤线粒体机制的探讨 |
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作者：黄琰霞 牛… 文章来源：洛阳市中心医院眼科 471009 点击数：1224 更新时间：2007/5/14 22:32:04 
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| 目的 探讨人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial；RPE）细胞氧化损伤中线粒体凋亡信号途径的作用机制。方法 体外培养的人RPE细胞随机分为正常组、氧化损伤组；氧化损伤组中分别加入200和400、600、800μmol/L 过氧化氢（Hydrogen peroxide；H2O2）培养24h, 建立氧化损伤模型；采用吉姆萨染色法观察氧化损伤前后人RPE细胞形态学变化，免疫组织化学方法检测凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor； AIF)和细胞色素C(cytochrome C； CytC)在细胞内表达及分布情况，免疫印迹法检测细胞浆中CytC及胞核内AIF蛋白表达的变化。结果 （1） 吉姆萨染色发现，氧化损伤组随H2O2浓度增加逐渐出现凋亡小体，凋亡细胞数呈剂量依赖性升高；（2）免疫组织化学显示：正常人RPE细胞 CytC表达于线粒体中，表现为胞浆颗粒状淡褐染。随H2O2浓度增加，阳性细胞因CytC释入胞浆而表现为胞浆褐染带增宽，平均光密度值增高；其中600μmol /L H2O2处理组阳性表达达到高峰，与正常组相比较，差别有统计学意义（P<0.05）；正常组人RPE细胞AIF染色为胞浆淡黄褐色，随H2O2浓度增高，阳性表达逐渐增强，平均光密度值增高，表现为细胞胞浆着色加深，且向胞核转位，其在各组中表达趋势同CytC。（3）免疫蛋白印迹法显示：正常人RPE细胞胞浆中有cytC蛋白弱表达，而胞核中未见AIF蛋白表达，随着H2O2浓度的升高,CytC及AIF蛋白表达增强，与正常对照组相比，各亚组中CytC及AIF蛋白水平明显增高，差别有统计学意义（P<0.01）。结论 H2O2可通过线粒体释放CytC、AIF诱导人RPE凋亡。
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| 会议投稿录入：huangyanxia 责任编辑：毛进 |
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