| 大鼠青光眼滤过手术模型的制作
路晖2 王宁利1*
首都医科大学附属北京同仁医院 100730
目的：用于研究青光眼术后伤口愈合和瘢痕化过程的常用动物模型是兔的滤过手术模型，但兔的某些基因序列并不完全清楚，使术后的一部分相关研究受到一定限制。大鼠、小鼠、非人灵长类与人同源性高，基因序列相对清楚，且大鼠是用于角膜、视网膜和其它一些创伤愈合的成熟模型，通过制作大鼠青光眼滤过手术模型，对以往建立的动物模型进行补充，更好地开展青光眼滤过手术的一些相关研究。方法：SD大鼠10只，制作以角膜缘为基底的结膜瓣，通过全巩膜隧道穿入前房一25号硅胶管，末端埋于结膜下，连续缝合结膜瓣。同样方法做另外3只大鼠，分别于术后2、5、10天做组织学检查，观察术后滤过泡形成情况结果：通过大鼠前房引流管植入术，可以在结膜下形成良好的滤过泡，经过7-11天逐渐瘢痕化。结论：大鼠引流管植入术是一个可靠的青光眼滤过手术动物模型，可用于滤过手术后伤口愈合、瘢痕化过程及手术相关方面的研究。
遗传性视网膜变性动物模型感光细胞早期变化
的形态学研究
段欣荣 李根林
首都医科大学附属北京同仁医院 100730
目的：了解遗传性视网膜变性的感光细胞在出生后早期发生的形态学变化, 为临床治疗提供依据。方法：取出生后不同时间的rd、rds小鼠及正常对照小鼠视网膜，经光镜、扫描电镜和透射电镜观察感光细胞的形态发生发育和结构变化过程，比较其在各型的动态变化和各型间的形态学差异。结果：rd鼠感光细胞变性发生早，生后1周偶见感光细胞核旁胞浆内出现肿胀变形的线粒体；2周时外核层细胞层数明显减少，可见核固缩及染色质凝聚，偶见外丛状层和内丛状层部分神经突起内出现变性的线粒体；3周时外核层只剩一层细胞，胞浆内可见髓样结构。外丛状层变薄，内核层稍薄。内丛状层内偶见髓样小体；4周时外核层仅残存少许胞体，感光细胞胞体与细胞核高度变形，核周胞浆内细胞器显著减少，明显空泡化，出现多量不成形结构。内、外核层之间界限不清。外丛状层极薄，部分区域已消失。内核层及内丛状层也变薄。rds鼠感光细胞变性发生晚，3周龄时可见散在的感光细胞核固缩，核周胞浆空泡化，以及胞浆内出现一些松散的、无定形的膜性结构。外丛状层变薄，其内神经突起减少，并出现空泡样结构；4周龄时外核层细胞层数减少，感光细胞核内染色质凝集成块。外丛状层变薄及其内神经突起明显减少，囊泡样结构多见。结论：感光细胞的变性改变与其基因型相关，不同遗传背景的视网膜变性有着不同的表型。
关键词：感光细胞，视网膜变性，rd小鼠，rds小鼠
腺相关病毒载体介导碱性成纤维细胞生长因子基因对
虹膜色素上皮细胞的转染及其表达
杨晓慧 孙葆忱 王宁利
首都医科大学附属北京同仁医院 100730
目的：评价重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus，rAAV）载体介导碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF)基因对体外培养 虹膜色素上皮细胞（iris pigment epithelial，IPE）的转染及其表达，为视网膜色素变性的联合治疗奠定基础。方法：rAAV-bFGF转染体外培养的IPE细胞， ELISA法检测转染后bFGF基因的表达，MTT法和流式细胞仪检测IPE细胞表达的bFGF蛋白的生物活性。结果：IPE细胞培养上清液中检测到bFGF的表达：转染组为1.208ng/ml?0.186ng/ml，未转染组为36.272pg/ml?7.533pg/ml,P=0.000，MTT法显示bFGF基因表达产生的蛋白对体外培养的IPE细胞有促增殖作用，流式细胞仪检测IPE细胞周期中S期的百分比：加入转染组培养上清的实验组细胞S期占21.19%?1.93%，加入未转染组培养上清的对照组细胞S期占16.47%?2.37%，P=0.009. 结论：IPE细胞能高效的被rAAV载体转导，高水平分泌表达了具有生物活性的bFGF。这为基因治疗联合神经营养因子与虹膜色素上皮移植治疗视网膜色素变性提供了理论支持。
关键词：蛋白， 腺相关病毒， 碱性成纤维细胞生长因子， 基因转染， 虹膜色素上皮
原发性开角型青光眼和原发性慢性闭角型青光眼降眼压前后视神经结构和功能改变及相关因素的研究
王兰
首都医科大学附属北京同仁医院 100730
目的: 探讨原发性慢性闭角型青光眼(PACG)与原发性开角型青光眼(POAG)的视神经对眼压的耐受性是否存在差异。
方法：PACG 36人49只眼和POAG 35人49只眼入选。全部入选患者进行眼科常规检查、降眼压前进行Heidelberg Retina Tomograph –II（HRT-II，海德堡视网膜断层扫描）及Humphrey静态视野检查（HFA，24-2 Full Threshold全阈值程序）。然后两组病人均根据病情的不同选择相应的降眼压治疗方案：原发性慢性闭角型青光眼：房角关闭小于2个象限，首先选择YAG激光虹膜周边切除术，如果眼压仍不能控制采用药物治疗进一步控制眼压。房角2个象限以上关闭者选择小梁切除术（术中用丝裂霉素）；原发性开角型青光眼：2种以下局部用药可以控制眼压者，选择药物治疗；2种以下局部用药不能控制眼压者，采取非穿透小梁切除手术（术中用丝裂霉素）治疗。经药物和激光治疗的患者如眼压降低，重复HRT检查，2周后重复视野检查。经手术治疗的患者，术后1个月以后重复HRT、视野。
采用配对t检验分别分析POAG和PACG眼压降低前后HRT视盘参数的变化，采用多因素方差分析，均衡治疗前眼压、眼压降低幅度、年龄、平均视网膜厚度、杯盘比等可能的影响因素，并比较POAG和PACG两组间视盘参数、筛板顺应性（治疗前后视杯深度差/治疗前视杯深度/眼压降低幅度）和视网膜神经纤维层在降眼压后的变化是否存在差别。
配对t检验比较眼压降低前后视野的平均缺损（MD）等指标的变化，并比较在POAG和PACG两组之间MD变化的差异。
结果：PACG组 49眼，36人，（女：20人，男16人）；年龄 58.0±9.0岁（42~74 岁），治疗前眼压42.7±9.6mmHg, 治疗后眼压15.1±4mmHg; POAG组49眼，35人，（女11人，男24人），年龄：36.2±16.1岁（21～73岁）；治疗前眼压34.8±8.6mmHg; 治疗后眼压17.2±5.3mmHg。视杯面积、杯盘面积比、视杯容积、垂直杯盘面积比，水平杯盘面积比等指标在PACG及POAG组在眼压降低后均明显降低，P<0.05, 眼压降低前后的差异在统计学上有显著性意义。盘沿面积、沿盘面积比、盘沿容积、平均视网膜厚度等指标在PACG组及POAG组在眼压降低后明显增加（P<0.05）, 眼压降低前后的差异在统计学上有显著性意义。筛板顺应性、盘沿面积差、视杯面积差、杯盘面积比差、平均视杯深度差在POAG和PACG两组间差异无显著性，视杯面积差、杯盘面积比差、平均视杯深度差与眼压降低幅度有关（P<0.05），平均视杯深度差与杯盘比也有关（P<0.05），筛板顺应性、盘沿面积差、视杯面积差、杯盘面积比差及平均视杯深度差与年龄、治疗前眼压、平均视网膜厚度均无关（P>0.05）。
眼压降低后，MD数值明显提高，眼压降低前后的差异统计学上有显著性意义；比较POAG和PACG两组治疗后的MD差值，差异无显著性意义（P>0.05）。
结论：眼压降低后青光眼视盘形态结构与视野参数均有一定的回复；但在PACG和POAG间，视盘形态结构与视野参数回复的程度无明显差异， PACG和POAG的筛板顺应性也没有差异， PACG和POAG对眼压的耐受性可能没有区别。
关键词：闭角型青光眼，开角型青光眼，视盘，筛板顺应性，视野
目的：观察大鼠包含黑视素的视网膜神经节细胞在慢高眼压条件下的病理改变，对比其同普通神经节细胞的异同。方法：利用巩膜表层静脉烧灼的方法制作慢性高眼压大鼠模型，Tonolab测量大鼠眼压。使高眼压状态持续12周。处死前5天，经双上丘荧光金逆行标记视网膜神经节细胞。取视网膜后，利用黑视素单克隆抗体进行免疫组织化学染色方法显示包含黑视素的视网膜神经节细胞，荧光金标记普通神经节细胞。在每片视网膜上，在距视盘上下左右各1mm、2mm和3mm处选12点，计数每点200X荧光显微镜视野内包含黑视素的神经节细胞的数量，在距视盘3mm处周边视网膜，每象限选3点，在共聚焦显微镜下扫描，利用Leica QWin软件行图像分析，计算普通神经节细胞的密度。SSPS软件行统计学分析，左右眼之间的数据行独立样本均数比较t检验，显著性水平为P<0.05。结果：
高眼压状态持续12周后，视网膜上包含黑视素的神经节细胞数量减少，未见到树突分支减少、树突中断等表现。包含黑视素的神经节细胞、普通神经节细胞存活率分别为78.69% 和78.35%，二者之间无显著性统计学差异。结论：慢性高眼压可以造成包含黑视素的神经节细胞数量减少，但细胞结构无明显改变。在慢性高眼压的条件下，此类细胞的损伤程度同普通神经节细胞一致。
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