| 1.目的：探讨一种可降低角膜移植排斥反应的基因治疗方法，同时可解决角膜供体材料来源匮乏问题，为组织工程角膜的构建和移植提供实验依据。2.方法：将TGF-β1成熟肽( Transforming Growth Factor-beta 1 Mature Peptide, TGF-β1MP)基因利用脂质体转染方法转移入组织工程角膜种子细胞中，利用流式细胞仪、RT-PCR、免疫组化、Western blot、ELISA等方法检测转染基因在角膜细胞的表达和免疫学活性。再将基因修饰的种子细胞种植于保留有后弹力膜、经冷冻脱水处理的猪角膜基质载体上，构建转基因后板层人工生物角膜，进行实验性移植。3. 结果：从mRNA和蛋白质水平均检测到TGF-β1MP基因在培养的角膜基质细胞和角膜内皮细胞的成功转染和高效表达。流式细胞仪检测淋巴细胞亚群分化结果显示，基因转染组与对照组比较，CD69+CD3+、CD25+CD3+、CD71+CD3+阳性细胞比率均下降，差异具统计学意义（P＜0.05）。RT-PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果显示，基因转染组与正常对照组相比较，淋巴细胞Th1类细胞因子（IL-2、IFN-γ、TNF-α）与β-actin的光密度比值降低，Th2类细胞因子(IL-4、IL-6) 与β-actin的光密度比值升高，差别具有统计学意义（P﹤0.05）。基因转染组角膜植片存活时间延长（平均为85d），与正常对照组（平均为43d）和转染空质粒组（平均为38d）相比差异具统计学意义（P﹤0.01）。4.结论：移植细胞高效表达的TGF-β1，具有负性免疫调节作用，可以较强地抑制同种异体角膜细胞移植及异种角膜基质移植后的免疫排斥反应，明显延长角膜植片透明存活时间。 |
