| 目的：克隆人MRG15（MORF4-related gene on chromosome 15，MRG15）的编码基因，构建荧光表达载体，并检测其在培养人晶状体上皮细胞中的表达，为研究MRG15与年龄相关性白内障（age related cataract，ARC）的相关性奠定基础。
方法：用RT-PCR的方法从人ARC的晶状体前囊膜中扩增MRG15的编码基因，克隆至pMD18-T载体并测序，结果正确后亚克隆至荧光真核表达载体pEGFP-N2中，酶切鉴定正确后采用脂质体法，瞬时转染培养人晶状体上皮细胞，荧光显微镜下检测MRG15-pEGFP-N2的定位。
结果：测序证实，从人ARC晶状体前囊膜中扩增出的MRG15 编码基因的序列及读框全部正确。重组质粒MRG15-pEGFP-N2经酶切后产生与理论预期长度相符的片段。脂质体法转染后24 h，观察到其主要在培养人晶状体上皮细胞的细胞核中表达。
结论：克隆了人MRG15的编码基因，成功构建了荧光真核表达载体MRG15-pEGFP-N2，并可在培养人晶状体上皮细胞中表达。 |
