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壳聚糖-角膜内皮细胞载体膜生物相容性的实验研究
作者:李纳  文章来源:首都医科大学北京同仁眼科中心  点击数1290  更新时间:2005/6/16 11:36:56  文章录入:wmzina  责任编辑:毛进
目的:通过细胞相容性和组织相容性试验,筛选一种理想的壳聚糖共混膜,探讨其作为角膜内皮细胞载体,进行角膜内皮细胞移植的可行性。 方法:制备两种不同的壳聚糖共混膜:1#(脱乙酰度83%,分子量30cp,含交联剂)和2#(脱乙酰度68%,分子量30cp,不含交联剂)。体外培养角膜内皮细胞,取传代细胞植于两种膜片上,根据细胞在膜上的生长情况判断其细胞相容性。将两种膜片,分为单纯植入前房组和角膜移植组(将角膜中央以环钻取下后,刮除角膜内皮和后弹力层,将壳聚糖膜固定于角膜内面,连续缝合角膜片。)定期行裂隙灯、角膜测厚、角膜内皮镜及组织学检查,以正常眼作空白组,比较两种膜片的组织相容性。 结果:细胞接种10天,1#,2#膜皆能在表面形成单层细胞,细胞密度1500~1800个/mm2,表明两种膜有良好的细胞相容性。1#膜保持膜片机械强度,细胞帖服良好。2#膜片表面细胞密度亦达到上述标准,但由于膜片在37度条件下已经孵育10天,膜片降解,机械强度明显下降,成膜性较差。组织相容性试验结果显示,两种膜片植入前房后,均发生早期异物反应,1#膜持续10天左右,可引起房水闪光强阳性,角膜厚度增加,但不引起角膜内皮细胞数量的下降和角膜细胞形态的改变。2#膜持续4天,可引起房水闪光中等程度阳性,角膜厚度增加,但亦不引起角膜内皮细胞数量的下降和角膜细胞形态的改变。异物反应数日后,再次发生前房的非感染性炎症反应,1#膜降解速度慢(约3个月),炎症反应温和持续时间较长,术后20天角膜中度水肿,以后逐渐恢复正常,除膜片附近角膜瘢痕化并有新生血管长入外其余部分角膜保持透明。角膜移植组发生虹膜与移植口的粘连。2#膜降解速度较快(约1个月),术7天后急性炎症反应导致前房积脓,角膜水肿,持续至术后3周左右,此后渐复正常,亦形成角膜瘢痕化和新生血管长入。角膜移植组,有50%病例发生角膜穿孔。 结论:壳聚糖生物载体膜片有良好的细胞相容性,同时具有促进角膜内皮细胞体外生长的作用。壳聚糖生物载体膜片在前房内的组织相容性还为达到理想要求,但初步得出结论,膜片植入前房后的早期异物反应与成膜时所用交联剂有关。而以后的持续炎症反应与膜片的降解速率有关(脱乙酰度直接影响膜片的降解速率)。因此控制交联剂的使用,调整膜片的脱乙酰度,可以降低前房炎症反应的时间和强度,逐步提高壳聚糖膜片的前房组织相容性。
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