目的 研究缺氧对鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运体(L-glutamate/L-aspartate transporter, GLAST)和谷氨酰胺合成酶 (Glutamine synthetase, GS)表达的影响,及对谷氨酸摄取的作用。
方法 采用出生3-7天的小鼠视网膜组织进行Müller细胞培养,采用125nmol/ml的氯化钴(CoCl2)溶液分别进行缺氧干预6h、12h、24h、48h和72h;不加CoCl2溶液培养的Müller细胞为正常对照。采用RT-PCR法、western blot法和免疫细胞化学染色法检测GLAST和GS的表达;并检测谷氨酸摄取及细胞凋亡情况。
结果 缺氧早期GLAST表达较正常对照组增强(P<0.000),CoCl2溶液干预12h后达到最强(P<0.05),之后逐渐降低。CoCl2溶液干预72h后GLAST表达与正常对照组相比无明显差异(P>0.05)。而缺氧也使GS的表达较正常对照组增加(P<0.000),CoCl2溶液干预48h后GS表达最强(P<0.000),之后开始下降。缺氧促进Müller细胞对谷氨酸的摄取,CoCl2溶液干预48h后L-[3,4-H3]-谷氨酸的摄取量最大(P<0.005),之后开始下降。CoCl2溶液干预后,Müller细胞死亡数较正常对照组无明显差异(P>0.05)。
结论 在一定时间范围内缺氧能够增强Müller细胞GLAST及GS的表达,增加谷氨酸的摄取。但持续缺氧最终会引起Müller细胞功能失代偿,从而导致谷氨酸的代谢能力降低。 |