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| 负载骨髓间充质干细胞的羊膜移植重建碱烧伤大鼠眼表的实验研究 |
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作者：刘国华 … 文章来源：北京大学第一医院 点击数： 更新时间：2006-6-21 9:15:20 
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| 目的：探索体外培养的人骨髓间充质干细胞的诱导分化条件，观察负载骨髓间充质干细胞的羊膜是否可以重建碱烧伤大鼠眼表及人骨髓间充质干细胞是否可在眼表分化为角膜上皮细胞。
方法：体外培养人骨髓间充质干细胞并经流式细胞仪鉴定，常规培养传代，将传三代的人骨髓间充质干细胞分为四组，分别予以不同刺激条件，期间用BrdU标记三天，共培养十天后种植于去上皮保存羊膜表面。碱烧伤法制成大鼠右眼完全角膜缘干细胞缺乏模型，并经印迹细胞学检查证实。将碱烧伤大鼠随机分为6组，A1、A2、A3、A4组分别移植经不同条件诱导的人骨髓间充质干细胞，B组移植负载人角膜缘干细胞，C组行单纯羊膜移植，D组为未处理组。观察术后眼表情况并进行评分。移植术后一个月处死所有大鼠，摘除右眼行冰冻切片后行HE染色观察上皮形态，免疫组化与免疫荧光检查检测BrdU以观察移植干细胞存活情况，检测ABCG2、K3/K12及Cx43等指标观察上皮分化方向，检测VEGF以观察干细胞对眼表新生血管抑制情况。
结果：体外培养人骨髓间充质干细胞与人角膜缘干细胞经BrdU标记后，用小鼠抗人BrdU单克隆抗体行免疫荧光检测示BrdU标记阳性。印迹细胞学检查证实碱烧伤大鼠眼表角膜结膜化，可见杯状细胞。移植术后一个月印迹细胞学检查证实A、B组大鼠眼表未见杯状细胞，C、D组可见杯状细胞。冰冻切片标本HE染色示A、B组均形成3-4层以上复层上皮，C组形成3层左右上皮，D组为1—2层上皮。免疫组化与免疫荧光检查均显示A、B组角膜表面可检测到BrdU、ABCG2阳性细胞。B组K3/K12、Cx43均为阳性，而A组Cx43均为阴性，A4组中有2个标本K3/K12为弱阳性，其余A组标本均为阴性。免疫荧光显示A、B组VEGF均较低，C组较强，D组最强。
结论：人骨髓间充质干细胞与角膜缘干细胞移植于大鼠眼表一月后仍可在眼表存活，它们均可以成功重建大鼠碱烧伤眼表，减轻眼表炎症反应，但是本研究显示术后一月时人骨髓间充质干细胞并未向角膜上皮分化，其重建眼表功能可能与其具有抗炎功能有关。
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| 会议投稿录入：goodlucklgh 责任编辑：毛进 |
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