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| 睫状神经营养因子和腺病毒介导脑源性神经营养因子对大鼠视神经损伤修复的作用 |
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作者：崔志利1，… 文章来源：西安 第四军医大学西京医院眼科，全军眼科研究所， 710032 点击数： 更新时间：2005-7-1 9:14:55 
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| 目的：通过观察SD大鼠视神经夹伤后视网膜上GAP-43(growth associated protein-43)蛋白和基因的表达变化，以及荧光金(fluoro-gold，FG)逆行标记RGC进行计数，了解玻璃体腔内注射睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor，CNTF)和腺病毒介导脑源性神经营养因子(adenovirally delivered brain-derived neurotrophic factor，Ad-BDNF)对视神经损伤、修复和再生的作用。方法：建立大鼠视神经夹伤模型；⑴实验动物分正常对照组、视神经夹伤对照组、CNTF治疗组和Ad-BDNF治疗组；⑵玻璃体腔内分别注入重组人CNTF 50ng(10µL)、Ad-BDNF 10µL和生理盐水10µL；⑶完整揭取整个视网膜组织行蛋白电泳检查；⑷全眼球超薄冰冻切片行GAP-43mRNA原为杂交；⑸FG逆行标记RGC后全视网膜铺片行RGC计数。结果：⑴正常成年SD大鼠视网膜上GAP-43呈现低表达，分子量约为47KD。正常成年SD大鼠视网膜上仅在节细胞层检测到少数细胞存在GAP-43mRNA杂交信号。经上丘注射荧光金后7天标记的正常成年SD大鼠视网膜上RGC数为2155±265个/mm2（n=12）。⑵视神经夹伤对照组大鼠视神经夹伤后，视网膜上GAP-43蛋白表达上升，在损伤发生后1周左右蛋白表达量达到最高峰，在损伤发生后4周左右时其表达量降低到接近正常水平。视神经夹伤后1周时存在于视网膜神经节细胞层中的GAP-43mRNA杂交信号表达相对较强，夹伤后2周时杂交信号减弱基本消失。视神经夹伤后视网膜上RGC数下降迅速，神经夹伤后1-4周时分别下降到正常值的61.1％、26.5％、20.1％和17.1％。⒊CNTF治疗组在损伤发生后2周内视网膜上GAP-43表达升高，与对照组比较差异显著（p<0.05）。CNTF治疗组视神经夹伤后1周内可以检测到视网膜上GAP-43基因的表达，2周时及2周以后杂交信号减弱基本消失，与对照组比较差异不明显。CNTF治疗组视神经夹伤后1-4周时分别下降到正常值的70.5％（显著高于对照组（P<0.05））、30.2％、19.0％和17.9％，夹伤后2-4周时检测到的结果和对照组比较差异不明显。⑷Ad-BDNF治疗组在损伤发生后4周内视网膜上GAP-43的表达均高于对照组（p<0.05）。Ad-BDNF治疗组视神经夹伤后4周内在视网膜上均能观察到GAP-43mRNA的杂交信号，其中在夹伤后1-2周时杂交信号相对较强。Ad-BDNF治疗组视神经夹伤后1-4周时分别下降到正常值的73.2％、35.8％、24.0％和21.1％，均显著高于对照组（p <0.05）。结论：⑴正常SD大鼠视网膜上GAP-43呈现低表达，分子量约为47KD；正常情况下仅在节细胞层能检测到个别细胞存在GAP-43mRNA杂交信号；视网膜上RGC数为2155±265个/mm2。⑵模型中视神经夹伤后早期可以看到作为神经修复和再生标志的GAP-43及其基因的增强表达，说明视神经本身对于损伤有修复和再生的反应。⑶由逆行标记RGC计数可以看出视神经夹伤后RGC的死亡主要发生在神经损伤后2周以内。⑷大鼠视神经夹伤后玻璃体腔内注射重组人CNTF在视神经夹伤后早期能够提高视网膜上GAP-43的表达，并且能在夹伤后早期保护RGC的死亡，但这种作用不持久，视神经夹伤2周以后基本消失。⑸大鼠视神经夹伤后玻璃体腔内注射重组人Ad-BDNF在视神经夹伤后能够提高视网膜上GAP-43蛋白及其基因的表达，并且能够保护视神经夹伤后RGC的死亡，这种作用可以持续到夹伤后4周。
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| 会议投稿录入：aya610 责任编辑：毛进 |
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