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氯通道蛋白3基因反义寡核苷酸在内皮素1对培养牛角膜内皮细胞增殖中的作用           
氯通道蛋白3基因反义寡核苷酸在内皮素1对培养牛角膜内皮细胞增殖中的作用
作者:王毓琴,… 文章来源:中山大学中山眼科中心 510060 点击数: 更新时间:2004-6-14
目的 观察氯通道蛋白3基因反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides, AS-ODN)在内皮素1(ET-1)对培养牛角膜内皮细胞增殖中的作用。方法 加入不同浓度的氯通道蛋白3 AS-ODN作用于培养牛角膜内皮细胞后,再加入的200pM ET-1,采用免疫荧光染色检测AS-ODN的摄取。应用流式细胞仪检测细胞周期和MTT比色分析法观察细胞增殖情况。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹(Western blot)检测ClC-3mRNA和蛋白的表达。结果 氯通道蛋白3 AS-ODN可被培养牛角膜内皮细胞摄取。不同浓度的反义氯通道蛋白3处理组MTT光吸收值(OD)值较对照组均显著降低,并具有浓度依赖性。反义氯通道蛋白3基因处理后,细胞G1期细胞比例比对照组明显增高,S期及G2期细胞比例则明显低于对照组。反义氯通道蛋白3基因能减少ET-1促进ClC-3 mRNA和蛋白表达作用,并具有浓度依赖性。结论 氯通道蛋白3 AS-ODN可被培养牛角膜内皮细胞摄取。不同浓度的AS-ODN抑制内皮素1对培养牛角膜内皮细胞的增殖,并使细胞增殖停滞在G1期,同时还能减少ET-1促进ClC-3mRNA和蛋白表达作用,并具有浓度依赖性。
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